Коллоидно-осадочные пробы

Для изучения белкового обмена в КДЛ достаточно широко используются коллоидно­осадочные пробы.

Основными реакциями этого типа являются тимоловая и сулемовая пробы.

Тимоловая проба основана на помутнении смеси: при взаимодействии сыворотки с насыщенным раствором тимола в вероналоновом буфере.

В норме 0-4 ЕД S-H.

Более высокие цифры единиц помутнения могут косвенно указывать на диспротеинемию и характеризуют повышение содержания гамма-глобулинов.

Сулемовая проба основана на том, что сулема в присутствии мелкодисперсных растворов белков способна образовывать коллоидные растворы солей ртути. При нарушении дисперсности белковых фракций сыворотки крови происходит осаждение грубодисперсных частиц.

Результат выражают в количестве миллилитров сулемы, пошедшем на титрование.

Норма 1,6-2,2 мл сулемы. Как правило, сулемовая проба бывает положительной при токсических поражениях печени, циррозе, силикозе.

Лабораторная диагностика нарушений азотистого обмена

Если белки сыворотки крови денатурировать растворами кислот (например, ТХУ, фосфорно-вольфрамовой или фосфорно-молибденовой) и удалить центрифугированием, то в растворимом центрифугате остается ряд низкомолекулярных азотсодержащих соединений. Эта группа соединений получила название фракции остаточного азота.

В состав фракции остаточного азота входят азот мочевины (46-60 %), азот аминокислот (25 %), креатина и креатинина (7,5 %), мочевой кислоты (4 %), индикана, аммиака (0,5 %) и др.

Мочевина

Елавной составной частью фракции остаточного азота является мочевина. Поэтому величина общего остаточного азота обычно пропорциональна величине мочевины, и для диагностических целей, как правило, исследуют содержание мочевины.

В качестве унифицированных утверждены диацетилмонооксимный метод и уреазный метод.

У здорового человека содержание мочевины в крови колеблется в пределах 2,5-8,33 ммоль/л. У лиц старше 60 лет уровень мочевины может слегка превышать норму.

Нормальные величины

Нормальные величины для мочи составляют 330-580 ммоль/сутки.

Значение

Содержание мочевины увеличивается при острых и хронических заболеваниях почек, протекающих с нарушением их функции; при снижении почечной перфузии вследствие шока, застойной сердечной недостаточности, обезвоживания при рвоте, поносе, повышенном диурезе или потоотделении; при усиленном катаболизме белка в случае острого инфаркта миокарда, ожоговой болезни, стресса; при диете с высоким содержанием белка.

Содержание мочевины снижается при недостаточном белковом питании, при повышенной утилизации белка в поздние сроки беременности, у детей в возрасте до года, при акромегалии, парентеральном питании, тяжелых заболеваниях печени, отравлении лекарствами, при нарушении всасывания.

Креатинин

Креатинин является конечным продуктом азотистого обмена.

Суточное выделение креатинина для каждого человека зависит от его мышечной массы и является довольно постоянной величиной.

В качестве унифицированного утвержден метод, основанный на реакции Яффе в модификации Поппера.

Нормальные величины

В сыворотке крови: у мужчин - 44-100 мкмоль/л; у женщин - 44-88 мкмоль/л.

Значение

За сутки с мочой выводится 4,4-17,7 ммоль креатинина.

Уровень креатинина возрастает при нарушении функции почек любого происхождения, активной акромегалии и гигантизме, гипертиреозе; при приеме аскорбиновой кислоты, фуросемида, глюкозы, стрептомицина, рентгеноконтрастных средств, содержащих йод.

Креатинин не является чувствительным показателем функционального состояния почек в начальной стадии хронической почечной недостаточности, однако увеличение его уровня может произойти еще до повышения содержания мочевины и остаточного азота.

Проба Реберга

Одновременное определение у одного и того же пациента концентрации креатинина в крови и моче значительно расширяет возможности исследования функционального состояния почек.

Для проведения пробы собирают мочу в течение четко обозначенного интервала времени (2, 4, 12 или 24 ч). Во время проведения пробы больной не должен принимать мясную пищу, кофе, чай, лекарства, а также АКТГ, кортизон, тироксин до и во время проведения теста. Количество принимаемой жидкости должно быть не менее 1,5-2 л, чтобы минутный диурез составил 2 мл/мин и более.

Взятие крови осуществляют в середине периода сбора порционной мочи. Нужно точно указать объем мочи, время, в течение которого она собрана, время, когда взята кровь. При сборе суточной мочи кровь берется в конце сбора мочи. Также необходимо указать рост и вес пациента для расчета поверхности тела.

В моче и крови определяют содержание креатинина и по формуле рассчитывают уровень фильтрации и реабсорбции.

где F - фильтрация;

U — концентрация креатинина в моче;

V- объем мочи в мл, отнесенный к минуте;

S - концентрация креатинина в сыворотке;

BSA - площадь поверхности тела в м2 (определяется по номо грамме).

Референтные пределы, метод Яффе:

1) 1-2 месяца - более 54 мл/мин/1,73 м2;

2) 3-12 месяцев - более 64 мл/мин/1,73 м2;

3) 3-13 лет - более 120 мл/мин/1,73 м2;

4) взрослые - более 95 мл/мин/1,73 м2.

Канальцевая реабсорбция (R) определяется по формуле:

где F - фильтрация клубочковая, мл/мин; минутный диурез - количество мочи / количество минут (время, за которое собрана моча);

V- минутный диурез.

В норме R = 99 %.

Варианты патологии клубочковой фильтрации:

1) более 120 мл/мин - ранние этапы сахарного диабета, гипертонической болезни, нефротического синдрома;

2) 85-30 мл/мин - умеренное снижение функции почек как настораживающий фактор при подозрении на почечную недостаточность;

3) 60-15 мл/мин - почечная недостаточность от компенсированной стадии до субкомпенсированной стадии;

4) менее 15-10 мл/мин - почечная недостаточность в стадии декомпенсации.

Варианты патологии канальцевойреабсорбции

Канальцевая реабсорбция выше 99,6 % говорит о различных видах гиповолемических состояний, менее 98 % - о нарушении функции канальцев (пиелонефрит, врожденные аномалии, интерстициальный нефрит, гломерулонефрит, почечная недостаточность).

Мочевая кислота является продуктом распада пуриновых нуклеотидов, входящих в состав нуклеиновых кислот, макроэргических соединений, некоторых витаминов. Величина экскреции мочевой кислоты с мочой зависит от присутствия пуринов в пище: при обычной диете с мочой ежедневно выделяется до 0,7 г мочевой кислоты, при богатой пуринами диете - до 1 г.

В КДЛ для определения содержания мочевой кислоты используют в основном химический колориметрический и ферментативный методы.

Принцип колориметрического метода

Мочевая кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив с образованием комплекса голубого цвета. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты.

Принцип ферментативного метода

Уриказа окисляет мочевую кислоту до аллантоина в соответствии с реакцией. Мочевая кислота + 2Н20 + С2 - уриказа аллантоин + 2Н202 + С02. Аллантоин не поглощает свет с длиной волны 293 нм, поэтому убыль оптической плотности смеси пропорциональна концентрации в ней мочевой кислоты.

Нормальные величины

В сыворотке крови у мужчин - 0,24-0,5 ммоль/л, у женщин - 0,16-0,4 ммоль/л.

Определение содержания мочевой кислоты в крови имеет большое диагностическое значение при подагре и почечной недостаточности. Гиперурикемия может наблюдаться также при лечении цитостатическими препаратами, злоупотреблении алкоголем, при голодании.

Лабораторная диагностика нарушений углеводного обмена В крови находится ряд углеводов, из которых самым важным является глюкоза. Ее концентрация в крови здорового взрослого человека составляет 3,33-5,55 ммоль/л. Из других углеводов, содержащихся в крови, следует отметить гликоген - 16,2-31,7 мг/л, фруктозу - 5,55-27,75 мкмоль/л, пентозу - 0,12-0,22 ммоль/л, другие полисахариды - около 1,8 г/л.

Глюкоза

Для определения глюкозы в крови предложено много методов, которые условно можно разделить на 3 группы.

Редуктометрические методы основаны на восстанавливающих свойствах глюкозы. К ним относится унифицированный метод Хайгедорна - Иенсена. Метод основан на свойстве сахаров при кипячении в щелочной среде восстанавливать красную кровяную соль в желтую кровяную соль. По степени восстановления титрометрически определяют концентрацию сахара крови. Недостаток метода заключается в том, что, в сущности, он определяет не только глюкозу, но и ряд других веществ, обладающих восстанавливающими свойствами (мочевую кислоту, глюкуроновую кислоту, витамин С и др.). Поэтому данные редуктометрических методов значительно выше концентрации глюкозы в крови.

Колориметрические методы основаны на цветных реакциях между глюкозой и концентрированной серной кислотой; глюкозой, концентрированной серной кислотой и альфа-нафтолом, или тимолом. К этой группе методов относится ортотолуидиновый метод.

Принцип: метод основан на образовании из глюкозы при нагревании в кислой среде оксиметилфурфурола, который, взаимодействуя с ортотолуидином, дает соединение зеленого цвета; интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации глюкозы в крови.

Энзиматические методы отличаются самой высокой специфичностью. Существуют различные возможности для энзиматического определения глюкозы. Наиболее широкое распространение получил глюкозооксидазный метод.

Клиническое значение

Гипергликемия - частый симптом при различных заболеваниях, прежде всего связанных с поражением эндокринной системы. Это сахарный диабет, феохромоцитома, тиреотоксикоз, акромегалия, гигантизм, синдром Кушинга. Наблюдается при заболеваниях поджелудочной железы (панкреатит, муковисцидоз, опухоль), шоке, ожогах. Гипергликемию вызывает ряд лекарств (глюкоза, кофеин, адреналин, АКГТ, кортикостероиды, тироксин, пероральные контрацептивы, диуретики, индометацин и др.).

Гипогликемия имеет место при инсулиноме, дефиците глюкагона, опухолях различных органов (рак надпочечников, желудка, фибросаркома), тяжелых поражениях печени, гипотиреозе и т. д.

С диагностической целью используют пробу с нагрузкой глюкозой - тест толерантности к глюкозе.

В течение 3-7 дней до начала теста обследуемый находится на обычной диете без ограничения и избытка жиров и углеводов.

За 3 дня отменяются инъекции глюкозы, кофеина, адреналина. В течение 3 дней пациент не должен изменять привычного режима питания и мышечной нагрузки, получая диету, содержащую не менее 150 г углеводов в сутки. В день, предшествующий проведению теста, последний прием пищи не позднее 20 ч. Перед проведением пробы необходимо 30 мин спокойно посидеть. Во время проведения пробы нельзя курить.

Кровь берут из пальца или из вены натощак и через 120 мин после перорального введения глюкозы (250-350 мл водного раствора глюкозы из расчета 1,75 г глюкозы на 1 кг массы обследуемого, для взрослого 75 кг, не более 75 г глюкозы для ребенка).

Если уровень глюкозы натощак превышает 8 ммоль/л, тест обычно прерывается.

Гликозилированный гемоглобин

Для скрининга населения на сахарный диабет определяют гликозилированный гемоглобин (HbAic). Определение HbAic может быть использовано также для диагностики ранних форм диабета (достоверно повышен у лиц с нарушенной толерантностью к глюкозе), для контроля за состоянием и лечением больных сахарным диабетом.

Гликозилированный гемоглобин - показатель гомеостаза глюкозы, интегральный показатель транзиторной гипергликемии, имевшей место у пациента в течение 3-4 месяцев, предшествующих определению.

В зависимости от метода определения содержание HbAic составляет 3-6 % от общего гемоглобина у здоровых лиц и около 20 % у пациентов с тяжелыми, запущенными, некомпенсированными формами сахарного диабета.

При определении HbAic используются методы хроматографии, электрофореза и изоэлектрического фокусирования. Эти методы характеризуются высокой точностью, но требуют специальной аппаратуры и реактивов, трудоемки в исполнении, поэтому наибольшее распространение получили менее точные, но более доступные химические колориметрические методы. Преимуществом этих методов является возможность использовать в качестве стандарта фруктозу и то, что условия взятия и хранения крови, гемоглобинопатии мало влияют на результаты анализа; эти методы не требуют специального оборудования, удобны для повседневного использования, могут быть выполнены с помощью готовых наборов реактивов.

Для работы используют цельную кровь, взятую с антикоагулянтами, эритроциты многократно отмывают от белков и глюкозы изотоническим (0,9 %) раствором хлорида натрия. Отмытые эритроциты до исследования могут храниться в холодильнике до 2 недель.

Липиды

В плазме крови человека присутствуют 4 основных класса липидов: холестерин и его эфиры, триглицериды, фосфолипиды! и неэстерифицированные жирные кислоты (НЭЖК). Первые три класса веществ образуют комплексы с апопротеинами и входят в состав липопротеинов.

Различают 3 группы липопротеинов. Наиболее крупными являются хиломикроны (ХМ) и липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП, или пребеталипопротеины). Они богаты триглицеридами, содержат апопротеины С. Менее крупными частицами являются липопротеины низкой плотности (ЛПНП или беталипопротеины), которые содержат апопротеины В. Самыми мелкими являются липопротеины высокой плотности (ЛПВП или альфалипопротеины), в состав которых входят апопротеины А.

На основании детального изучения липопротеинового спектра плазмы (сыворотки) крови у здоровых лиц и у больных, страдающих различными нарушениями липидного обмена, было показано, что повышение уровня тех или иных классов липопротеинов крови протекает по строго определенным закономерностям, независимо от того, является ли гиперлипопротеинемия наследственной (первичной) или она развивается вследствие других причин (вторичная гиперпротеинемия). Почти все случаи гиперлипопротеинемий могут быть объединены в 5 типов.

Предварительное выявление дислипопротеинемий можно провести по визуальной оценке сыворотки крови (табл. 25).